Добре дошли в Българският форум за пчелари.
Резултати от 1 до 3 от общо 3
  1. #1
    Автор
    Регистриран
    08.01.2014
    Мнения
    173
    Пчеларски район
    област Плевен

    Изолиране на инвертаза от хлебни дрожди

    Здравейте колеги!
    Ето на какво попаднах при разучаването на ензима. Може на някой ентусиаст да му е полезно!

    Ензимът инвертаза (наричан още захараза) разгражда захарозата до глюкоза и фруктоза. Получава се инвертна захар, откъдето идва и името на ензима.


    Наименованието на инвертазата по ензимната номенклатура е вета-D-фруктофуранозид-фруктохидролаза.


    Дрождите (в частност хлебните) имат способността да натрупват в клетките си големи количества ензим, поради което може да се използват като източник за получаване на препарат на инвертаза. За целта обаче е необходимо дрождевите клетки да се поставят при условия, при които единствен компонент на хранителната им среда е захарозата. Това води до индуциране на образуването на инвертаза и до нейното натрупване в големи количества.


    Ферментация на захари от хлебните дрожди


    В три чаши от 100 ml са поставени по 40 ml вода Във всяка от тях са разтворени съответно по 10 g лактоза, фруктоза и захароза. Към всички се добавя 1 g мая (хлебни дрожди). Пробите се загряват до 40 °C.


    Очевидно дрождите не ферментират лактозата. Умерена ферментация протича в чашата с фруктоза. Най-интензивно протича ферментацията в чашата, съдържаща захароза.


    Ензимът е вътрешноклетъчен и се натрупва между клетъчната стена и клетъчната мембрана. За да се изолира, е необходимо да се разруши клетъчната стена. Това може да стане чрез механично стриване на клетките; чрез автолиза (при 45° С за 2 h); чрез обработка с толуол или с бензол; чрез обработка с ултразвук; при дълбоко замразяване с течен азот; чрез дезинтеграция (метод за разрушаване целостта на микробните клетки с помощта на специални апарати (дезинтегратори). След разрушаването на клетъчната стена и отделянето на биомасата ензимът остава в разтвора. Разтворът може да се използва като готов препарат на инвертаза, но е много разреден и е необходимо да се концентрира или ензимът да се утаи чрез различни методи. Най-често се прилага утаяване с етилов алкохол. Утаеният белтък, който съдържа ензима инвертаза, се отделя чрез центрофугиране и се разтваря в дестилирана вода, към която се прибавя глицерол. Целта е да се повиши стабилността на ензима. В разтвор на глицерол препаратът на инвертазата може да се съхранява до 18 месеца в хладилник с минимални загуби на активността му.




    Указания за практическа работа:




    А/ Необходими материали: Хлебни дрожди, захароза, кварцов пясък, дестилирана вода, 96°-ов етанол, глицерол, 10% NaOH, 5% CuSO4.
    Б/ Ход на опита: В конични колби от 300 ml се поставят по 30 g хлебни дрожди и се суспендират с 30 ml 20%-ов разтвор на захароза. Добре е колбите да се поставят на клатачка за около 1,5 h (ако няма клатачка, необходимо е суспензията периодично да се разбърква за по-добра аерация). След обогатяването на дрождите с инвертаза, сместа се центрофугира за отделяне на клетките. Те се прехвърлят с малко вода в хаванче, прибавя се кварцов пясък и се стриват около 5—10 min, за да се разрушат клетъчните стени. Сместа се прехвърля в центрофужни епруветки, след което кварцовият пясък и останалата биомаса се смива с вода в същите епруветки.
    Центрофугира се за 10 min при 6000 min-1. След отделяне на биомасата течността над утайката внимателно се измерва и се прехвърля в бехерова чаша от 200 ml, поставена в ледена баня. За утаяване на ензима се прибавя внимателно, по стените на чашата и при постоянно разбъркване, 1,5 обема етанол, охладен до —5 °С. След прибавяне на цялото количество етанол сместа се бърка още 10 min и се центрофугира при 1000 min-1 за 10 min. Течността се излива внимателно, получената утайка се разтваря в— 5—6 ml студена дестилирана вода и се прибавят 2—3 ml глицерол. Полученият глицеролов препарат на инвертаза се съхранява в хладилник.


    В две епруветки се наливат по 5 ml 10%-ов разтвор на захароза. Към първата се прибавя 1 ml вода, а към втората — 1 ml от получения препарат на инвертаза.


    През 10 min се вземат проби и се анализират за редуциращи захари.

  2. #2
    VIP Автор
    Регистриран
    14.02.2014
    Мнения
    1,056
    Пчеларски район
    Сливен
    Интересна информация, благодаря за споделянето.
    В един от пчеларските вестници имаше рецепта на пчелари сърби които правят инвертиран сироп от захар, мед и вода. Май ще е по-лесно от маята. Иначе хлебната мая след преваряване се използва като протеинова добавка към сиропа.

  3. #3
    Автор
    Регистриран
    08.01.2014
    Мнения
    173
    Пчеларски район
    област Плевен
    Те рецептите за инвертиране на сироп с мед и поддържане на температура са ясни. Има ги на много места, но самия процес е бавен и изисква често разбърване. Когато се ползва ензима инвертаза не е така, тогава процеса е в пъти по бърз. Ако при първия вариянт ви трябват няколко дни, то при втория, с ензима ви трябват няколко часа до максимум ден, в зависимост от силата на ензима и количеството му.

 

 

Информация за темата

Потребители разглеждащи тази тема

В момента има 1 потребител (и), разглеждащ (и) тази тема. (0 потребител (и) и 1 гост (и))

Разрешения за писане

  • Вие не може да да публикувате нови теми
  • Вие не може да публикувате мнения
  • Вие не може да публикувате прикачени файлове
  • Вие не може да редактирате вашите мнения
  •